接下来，研究者尝试通过三酶级联法从PPO不对称合成L-PPT。为了克服不利的热力学平衡，研究人员通过耦合PtTA、GluDH和GDH设计了一个生物催化级联系统。研究者也构建了体内级联表达系统，并进一步优化了催化反应条件以及反应体系中各组分的浓度。结果表明，在最佳反应条件下，当OPP浓度低于400 mM时，其可在12 h内完全转化为L-PPT，而在500 mM PPO下，14 h可达到98.36%的转化率。

研究人员进一步使用双转氨酶级联一锅法对D,L-PPT进行去消旋化。基于研究者之前的研究，Ym DAAT对D-PPT具有较高的活性,因此，采用Ym DAAT催化D-PPT和PPO之间的氨基转化，然后在PtTA催化下从PPO合成L-PPT，并通过氨基供体和PtTA的巧妙结合，产生可以作为Ym DAAT氨基受体的副产物。研究者进一步探究了反应体系各组分的浓度和酶的比例，在最佳反应条件下， L-PPT的产率在90%以上，反应体系在最高底物浓度条件下也表现出优异的催化效率。

总之，在该研究中，研究者发现了一种具有良好活性、稳定性和底物耐受性的新型耐热转氨酶PtTA。确定了PtTA的关键活性中心残基。在此基础上，开发了两个PTTA驱动的多酶级联系统，探索了其在L-PPT生产中的应用。利用PPO不对称合成L-PPT，将PtTA、LsGluDh和EsGDH三酶级联，构建了体内三酶级联重组E. Coli G，实现了400 mM PPO的完全转化。

此外，还构建了两个转氨酶的级联反应，利用一锅法对D,L-PPT进行去消旋化，在最高底物浓度下获得了90.43%的产率。这些优良的催化性能表明，转氨酶驱动的级联体系在克服热力学限制有效地合成L-PPT方面表现出了巨大的效率，在L-PPT生物合成中具有广阔的应用前景。