• 申请公布号：CN110577901A

• 申请公布日：2019.12.17

• 申请号：2019109158314

• 申请日：2019.09.26

• 申请人：***

• 发明人：***

• 地址：***

• 分类号：C12N1/14(2006.01)I;  

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法。该方法具体步骤包括：将白腐真菌活化培养；通过高效液相色谱法测定磺酰脲类除草剂的残留浓度，再采用白腐真菌对磺酰脲类除草剂的降解效率和半衰期进行分析，并且选出优势降解菌株；利用白腐真菌的优势降解菌株分别降解氯嘧磺隆和苯磺隆。本发明将白腐真菌应用于氯嘧磺隆与苯磺隆的降解工作中，利用高效液相色谱法测定农药的降解率，使土壤中的氯嘧磺隆与苯磺隆得到了有效的去除，且本发明采用白腐真菌进行降解无毒、经济环保且无二次污染。

背景技术：

白腐真菌属于担子菌纲，少数属于子囊菌纲。白腐真菌的降解活动发生在次生代谢阶段，且在细胞外进行。当碳、氮、硫等主要营养物质受到限制时，菌体细胞会形成与降解过程相关的各种酶，组成细胞外降解系统，由酶触发启动自由基链式反应，对底物进行无特异性的氧化降解。两种除草剂均是选择性内吸传导型除草剂，以植物体内的乙酰乳酸合成酶(als)为靶标，通过抑制支链氨基酸的合成，使细胞的有丝分裂停止，阻碍细胞的正常生长。

氯嘧磺隆是一种超高效的磺酰脲类除草剂，具有高选择性、可混性强、杀草谱广等特点，主要用于大豆田防除阔叶杂草，但它对多种作物药害强，而且残效较长；苯磺隆的作用对象主要针对麦田顽固阔叶杂草，施用地区广、面积大，但它影响后茬作物的安全性，且连年施用导致麦田草相发生变化。

目前对解决氯嘧磺隆、苯磺隆残留药害问题采取了许多措施，但效果都不明显。而对于生物降解也是一直研究的重点，但是一直没有找到一种能够有效降解氯嘧磺隆、苯磺隆的微生物降解方法。因此，找到一种合适的方法对两种除草剂进行降解，对受到污染的土壤进行修复，具有生态和经济上的意义。

技术特征：

1.白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：该方法具体步骤包括：

（1）将白腐真菌活化培养；

（2）通过高效液相色谱法测定磺酰脲类除草剂的残留浓度，再采用白腐真菌对磺酰脲类除草剂的降解效率和半衰期进行分析，并且选出优势降解菌株；

（3）利用白腐真菌的优势降解菌株分别降解氯嘧磺隆和苯磺隆。

2.根据权利要求1所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：该方法具体步骤包括：

（1）将w菌株(lenzitesbetulina)、606菌株(irpexlacteus)和751菌株(funaliatrogii)分别接种于固体培养基上，然后在倒置于培养箱中在恒温下培养；向麦芽浸粉液体培养基中加入5mg除草剂，并将活化培养后的w菌株(lenzitesbetulina)、606菌株(irpexlacteus)和751菌株(funaliatrogii)三株白腐真菌挑取等量接入其中，黑暗的条件下培养；

（2）通过高效液相色谱法测定磺酰脲类除草剂的残留浓度；

设置实验组和对照组两组对比，向实验组中加入菌株，对照组为空白，分别在摇床中培养7天后进行农药残留测定，找出对两种农药降解率最高的菌株，即为优势降解菌株；利用优势降解菌株测定对氯嘧磺隆和苯磺隆的降解效率和半衰期；

（3）利用白腐真菌的优势降解菌株分别降解氯嘧磺隆和苯磺隆。

3.根据权利要求1或2所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：白腐真菌活化培养的具体方法包括：

将w菌株(lenzitesbetulina)、606菌株(irpexlacteus)和751菌株(funaliatrogii)分别接种于固体培养基上，然后在倒置于培养箱中恒温培养；

实验组和对照组在条件相同的情况下，向麦芽浸粉液体培养基中加入除草剂，并将活化培养后的w菌株(lenzitesbetulina)、606菌株(irpexlacteus)和751菌株(funaliatrogii)三株白腐真菌分别用挑取等量接入其中，黑暗的条件下培养。

4.根据权利要求3所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：将菌株倒置于培养箱中在恒温25-30℃下培养5-7d；向麦芽浸粉液体培养基中加入3-8mg除草剂；活化培养后的菌株在分别用直径3-7mm打孔器挑取1-5块等量接入其中，在摇床中以30℃、130rpm、黑暗的条件下培养7d。

5.根据权利要求1所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：测定白腐真菌对氯嘧磺隆和苯磺隆的降解率的具体方法包括：

设置实验组和对照组两组对比，向实验组中加入菌株，对照组为空白，温度、ph值相同，在摇床中培养后进行农药残留测定，找出对两种农药降解率最高的菌株，即为优势降解菌株；利用优势降解菌株测定对氯嘧磺隆和苯磺隆的降解效率和半衰期。

6.根据权利要求5所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：降解率的测定方法是：

将白腐真菌w菌株(lenzitesbetulina)、606菌株(irpexlacteus)和751菌株(funaliatrogii)先经平板培养基培养，放在恒温培养箱中活化培养，然后在无菌条件下挑取等量菌块接入灭菌后的培养基中，在25℃、ph=7.0，氯嘧磺隆初始浓度为60mg/l，苯磺隆初始浓度为50mg/l的条件下，培养7天，利用高效液相色谱法测定降解率。

7.根据权利要求1所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：氯嘧磺隆在初始浓度60mg/l，温度为25℃，ph=7的条件下，利用优势降解菌株中的w菌株对氯嘧磺隆降解。

8.根据权利要求1所述的白腐真菌降解氯嘧磺隆和苯磺隆的方法，其特征在于：苯磺隆在初始浓度50mg/l、25℃、ph=7的条件下，利用优势降解菌株中的606菌株对苯磺隆降解。

有关此专利详情请联系农药知识产权运营交易中心； 联系人：史先生；联系电话：0513-89093796。