申请公布号：CN103163131A

申请公布日：2013.06.19

申请号：2013101166048

申请日：2013.04.07

申请人：*****

发明人：***

地址：******

分类号：G01N21/78(2006.01)I; G01N21/25(2006.01)I  

摘要： 本发明涉及一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定试纸。本发明的技术方案是：利用温敏微胶囊技术制成检测试纸，在特定温度临界区域，释放包裹的胆碱酯酶，催化靛酚乙酸酯水解显色，进而判定农药残留情况。本发明为一次性使用，价格低廉，不需要专门配制试剂，省去分析仪器的维护工作；使用较人工挤压更简单，结果判定一目了然，无须培训；试剂用量更少，检测时间更短，在1min内完成；胆碱酯酶受微胶囊保护更稳定，保存时间长；溶液的37℃-40℃热环境容易实现，温度控制更方便、精准，不会出现不够湿润和温度太低情况；便于推广，是农贸市场、超市、学校、酒店、工厂等场所快速检测农药残留的首选。  

技术领域：

采用一种一步法检测食用农产品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测试，具体涉及一种在一张基质片上实现酶和底物并存且不发生催化反应的农药残留检测试纸。

背景技术：

农业生产中，会在很长的一段时间内使用化学性农药，如果不按规定的用药量、次数、方法或安全间隔期施药，或施用了不该使用的农药，就会引起农药超标或农药中毒。在我国农药中，70％为有机磷农药，而在我国生产使用的有机磷农药中，70％为剧毒、高毒类，而且较多是禁止在蔬菜作物上使用的。现在标准施行的农残测定需要通过有机溶剂提取净化和用大型分析仪器进行，无法对廉价的蔬菜进行随时随地或快速的检测而形成的监管不到位。因此，为了满足现场检测及对大批量样品进行快速筛查等要求，开发农药残留快速检测技术有着积极重要的现实意义。目前农药残留快速检测卡主要有三种形式，一种是需要对折的农残卡(例如GB/T5009.199-2003中的速测卡法)，此卡存在着操作繁琐，人工对折反应不充分，检测时间长、抗干扰能力较差的问题；第二种是一步法的农残卡，例如专利公开号CN104655621A中是将显色垫与酶垫依次固定在一张底板上，反应过程显色垫上的显色物质未能充分的与酶垫上的胆碱酯酶产生催化反应。但目前的检测方法依然存在着检测时间长、操作繁琐、灵敏度高的问题，因此，开发一种更适合基层快速筛查有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测试纸，对保障人民群众的身体健康有着重要的意义。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供了一种一步法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测试纸，具体涉及一种在一张基质片上实现酶和底物并存且不发生催化反应的农药残留检测试纸。检测过程不需要昂贵的仪器和试剂，操作简单，灵敏度高。本发明通过以下步骤来实现：1、为了达到其一步检测目的，本发明方法将胆碱酯酶与靛酚乙酸酯综合固定在基质片上，检测时只需直接滴加样品前处理液即可一步完成检测。当待检液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药时，待检液使得基质片上的胆碱酯酶与靛酚乙酸酯复溶并发生催化反应，结果显示蓝色；若有有机磷或氨基甲酸酯类农药残留存在，则会在基质片上无法产生蓝色或蓝色很浅；为了达到在储存过程中靛酚乙酸酯与胆碱酯酶有水分存在或其他因素导致发生催化反应而失效，将含有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯的基质片进行抽真空冷藏保存。2、本发明的基质垫上含有胆碱酯酶，胆碱酯酶的活力单位在40-75U；3、本发明的基质垫上含有靛酚乙酸酯，其在液体状态下时490nm处吸光度值为0.2。本发明的有益效果：此有机磷和氨基甲酸酯类农药残留速测试纸物理组成中仅有一片基质片组成，样品经过前处理提取后，直接将样品液滴加于试纸片上，使得样品与基质片上的酶、底物充分反应，从而使得加样到检测完成只需3-6min，甚至更短，使用简便，若样品液中有农药残留时，试纸片颜色由橙色变为白色，若无农药残留时，试纸片颜色由橙色变为蓝色，检测结果用肉眼或对应的检测设备都可轻易进行判读；采用上述方法后，解决了农贸市场等基层检测单位对大量样品筛查时存在的耗时长、反应不充分、操作繁琐、检测结果不易判读等问题，可广泛用于有机磷及氨基甲酸酯类农药的快速检测。具体实施方式下面通过附图和具体的实施例对本发明的构思、具体技术方案进行详细的说明，但是本发明所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。下面结合附图对本发明作进一步说明：图1是本发明实施例所述的农药残留检测试纸；图2是本发明实施例所述的农药残留检测试纸出现的阴性结果；图3是本发明实施例所述的农药残留检测试纸出现的阳性结果。本发明为一步法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测试纸，包括基质片、酶及反应底物，检测试纸的直径为9-12mm。检测过程：直接将样品液滴加于试纸片上，使得样品与基质片上的酶、底物充分反应，从而使得加样到检测完成只需3-6min，甚至更短。若样品液中有农药残留时，试纸片颜色由橙色变为白色，若无农药残留时，试纸片颜色由橙色变为蓝色，检测结果用肉眼或对应的检测设备都可轻易进行判读。作为本发明优选的实施方式，基质片的最优尺寸为：直径为12mm的圆片。作为本发明优先的实施方式，基质圆片含胆碱酯酶。作为本发明优先的实施方式，基质圆片胆碱酯酶的量为40-75U。作为本发明优先的实施方式，基质圆片含靛酚乙酸酯。作为本发明优先的实施方式，基质圆片靛酚乙酸酯的量为其在液体状态下时490nm处吸光度值为0.2的浓度值。本发明优先实施例1：本实施例提供了一种一步法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测试纸，包括直径为9-12mm基质片、胆碱酯酶及靛酚乙酸酯，胆碱酯酶的量为40-75U，靛酚乙酸酯的量为其在液体状态下时490nm处吸光度值为0.2的浓度值。检测农药残留的步骤如下：步骤1、制备空白对照液，空白对照液选用PH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液，将农药残留检测试纸平放，往检测试纸上加入30μL磷酸盐缓冲溶液，37℃条件下反应6min，观察显色结果，若结果显色为蓝色，表示对照液中无农药残留(参照图2)。步骤2、制备模拟样品，模拟样品为加标灭多威为0.3mg/kg的市售白菜阴性样品。蔬菜模拟样品的处理步骤为：取5g鲜重蔬菜样品剪成约1cm×1cm左右大小的碎片，置于样品杯中，之后加入10mlPH值为7.5磷酸盐缓冲溶液，振摇2min，静置2min，上清液为待测液。步骤3、将农药残留检测试纸平放，往检测试纸上加入30μL待检液，37℃条件下反应6min，观察显色结果，若结果显色为白色，表示模拟样品液中有农药残留(参照图3)。按照上述的模拟样品的检测操作，使用不同浓度有机磷和氨基甲酸酯类农药加标于白菜样品，检测模拟样品的检测灵敏度，结果如下所表示：农药名称灵敏度/mg/kg农药名称灵敏度/mg/kg农药名称灵敏度/mg/kg甲胺磷1.5乙酰甲胺磷3.0久效磷2.0对硫磷1.5敌敌畏0.3甲萘威2.0水胺硫磷3.0敌百虫0.3好年冬1.0马拉硫磷2.0乐果1.0呋喃丹0.5氧化乐果2.0灭多威0.3需要指出的是，以上的两个实施例只是对本发明的解释，并非是对发明的限定，在不违背本发明的精神的情况下，本发明可以作任何形式的修改，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

技术特征：

1.一种一步法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测试纸，其特征在于：在一张基质片上实现酶和底物并存且不发生催化反应的检测试纸。

2.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于所述的胆碱酯酶的活力单位在40-75U，所述靛酚乙酸酯液体状态下的490nm处吸光度值为0.2。

3.根据权利要求1、2所述的检测试纸，其特征在于将基片浸泡于胆碱酯酶液中，以物理形式固定胆碱酯酶，室温晾干。

4.根据权利要求1、2、3所述的检测试纸，其特征在于将胆碱酯酶试纸浸泡于吸光度值为0.2的靛酚乙酸酯溶液上，除湿晾干。

技术总结

本发明提供了一种能检测食用农产品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测试纸。组成形式为农残检测试纸，组成成分为：直径为11mm‑20mm的基质片、活力单位在40‑75U的胆碱酯酶及液体状态下的490nm处吸光度值为0.2的靛酚乙酸酯。检测过程中将样品进行前处理，取1滴样品前处理液于检测试纸中，37℃条件下反应6min，观察显色结果，若结果显色为蓝色，表示无农药残留，若显色为白色，表示有有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。本方法中的农残卡制作过程和检测过程不需要昂贵的仪器和试剂，操作简单，灵敏度很高。

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